ⅠNukleinsyreiintroduksjon
Nukleinsyre er delt inn i deoksyribonukleinsyre (DNA) og ribonukleinsyre (RNA), blant hvilke RNA er delt inn i ribosomalt RNA(rRNA), budbringer-RNA(mRNA) og overførings-RNA(tRNA) i henhold til dens forskjellige funksjoner.DNA er hovedsakelig konsentrert i kjernen, mitokondrier og kloroform, mens RNA hovedsakelig er distribuert i cytoplasma.Som det materielle grunnlaget for genuttrykk spiller nukleinsyreekstraksjon en ekstremt viktig rolle i molekylærbiologisk forskning og klinisk molekylær diagnose.Konsentrasjonen og renheten av nukleinsyreekstraksjon vil direkte påvirke den påfølgende PCR, sekvensering, vektorkonstruksjon, enzymfordøyelse og andre eksperimenter.
Ⅱ Nukleinsyreekstraksjon og rensemetode
① Fenol/kloroform ekstraksjonsmetode
Fenol/kloroform-ekstraksjon er en klassisk metode for DNA-ekstraksjon, som hovedsakelig bruker to forskjellige organiske løsemidler for å behandle prøvene, oppløsning av DNA-basert nukleinsyre i vannfasen, lipider i organisk fase, og proteiner mellom de to fasene.Denne metoden har fordelene med lav pris, høy renhet og god effekt.Ulempene er komplisert drift og lang tid.
② Trizol-metoden
Trizol-metoden er en klassisk metode for RNA-ekstraksjon.Trizol-metoden deles inn i vannfase og organisk fase etter sentrifugering med kloroform, hvor RNA løses i vannfasen, vannfasen overføres til nytt EP-rør, utfelling oppnås etter tilsetning av isopropanol, og deretter etanolrensing.Denne metoden er egnet for RNA-ekstraksjon fra dyrevev, celler og bakterier.
③ Sentrifugalkolonnerensemetode
Sentrifugekolonnerensemetoden kan adsorbere DNA spesifikt gjennom spesielle silisiummatriseadsorpsjonsmaterialer, mens RNA og protein kan passere jevnt, og deretter bruke høyt salt lav PH for å kombinere nukleinsyre, lav salt høy PH verdi eluering for å separere og rense nukleinsyre.Fordelene er høy rensekonsentrasjon, høy stabilitet, ikke behov for organisk løsemiddel og lav pris.Ulempen er at det må sentrifugeres trinn for trinn, flere operasjonstrinn.
④ Magnetiske perler metode
Den magnetiske kulemetoden går ut på å splitte cellevevsprøven gjennom lysatet, frigjøre nukleinsyren i prøven, og så blir nukleinsyremolekylene spesifikt adsorbert på overflaten av den magnetiske perlen, mens urenheter som proteiner og sukker blir igjen i væsken.Gjennom trinnene cellevevssplitting, magnetisk perlebinding med nukleinsyre, nukleinsyrevasking, nukleinsyreeluering, etc., oppnås til slutt ren nukleinsyre.Fordelene er enkel betjening og kort tids bruk, uten behov for trinnsentrifugering.Den har lave tekniske krav og kan realisere automatisk og massedrift.Den spesifikke kombinasjonen av magnetisk perle og nukleinsyre gjør den ekstraherte nukleinsyren med høy konsentrasjon og renhet.Ulempen er at dagens markedspris er relativt dyr.
⑤ Andre metoder
I tillegg til de fire ovennevnte metodene er det kokende cracking, konsentrert saltmetode, anionisk vaskemiddelmetode, ultralydmetode og enzymatisk metode, etc.
Ⅲ Type nukleinsyreekstraksjon
Foregene har verdens ledende Direct PCR-plattform, dobbeltkolonne RNA-isolasjonsplattform (kun DNA + kun RNA).Hovedproduktene inkluderer DNA/RNA-isolasjonssett, PCR og Direct PCR-reagenser molekylære laboratoriereagensserier.
① Total RNA-ekstraksjon
Total RNA ekstraksjonsprøver inkluderer blod, celler, dyrevev, planter, virus osv. Høy renhet og høy konsentrasjon av total RNA kan oppnås gjennom total RNA ekstraksjon, som kan brukes i RT-PCR, chip analyse, in vitro translasjon, molekylær kloning, Dot Blot og andre eksperimenter.
Foregene relatertRNA-isolasjonssett
Animal Total RNA Isolation Kit--Raskt og effektivt ekstraherer total-RNA av høy renhet og høy kvalitet fra forskjellige dyrevev.
Cell Total RNA Isolation Kit--Høyrenset og høykvalitets total-RNA kan fås fra forskjellige dyrkede celler på 11 minutter.
Plant Total RNA Isolation Kit--Trekk raskt ut total-RNA av høy kvalitet fra planteprøver med lavt innhold av polysakkarid og polyfenol.
Viralt RNA-isolasjonssett--Isoler og rens viralt RNA raskt fra prøver som plasma, serum, cellefrie kroppsvæsker og cellekultursupernatanter.
② Genomisk DNA-ekstraksjon
Genomisk DNA-ekstraksjonsprøver inkluderer jord, avføring, blod, celler, dyrevev, planter, virus, etc. Genomisk DNA-ekstraksjon kan brukes i enzymfordøyelse, DNA-bibliotekkonstruksjon, PCR, antistoffpreparat, Western blot-hybridiseringsanalyse, genchip, høy -gjennomstrømningssekvensering og andre eksperimenter.
Foregene relatertDNA-isolasjonssett
Dyrevevs-DNA-isoleringssett--Rask ekstraksjon og rensing av genomisk DNA fra flere kilder, som dyrevev, celler, etc.
Blod DNA Midi Kit (1-5 ml)--Rens raskt høykvalitets genomisk DNA fra antikoagulert blod (1-5ml).
Buccal vattpinne/FTA-kort DNA-isolasjonssett--Rens raskt høykvalitets genomisk DNA fra bukkal vattpinne/FTA-kortprøver.
Plant DNA-isolasjonssett--Rens raskt og oppnå høykvalitets genomisk DNA fra planteprøver (inkludert polysakkarider og polyfenolplanteprøver)
③ Plasmidekstraksjon
Plasmid er et slags sirkulært lite molekyl-DNA i celler, som er en vanlig bærer for DNA-rekombinasjon.Metoden for plasmidekstraksjon er å fjerne RNA, skille plasmid fra bakteriell genomisk DNA og fjerne protein og andre urenheter for å oppnå relativt rent plasmid.
Generelt Plasmid Mini Kit--Rens raskt høykvalitets plasmid-DNA fra transformerte bakterier for rutinemessige molekylærbiologiske eksperimenter som transformasjon og enzymfordøyelse
④ Andre ekstraksjonstyper, miRNA-ekstraksjon, etc.
Animal miRNA isolasjonssett--Raskt og effektivt trekke ut små RNA-fragmenter av 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA fra forskjellige dyrevev og celler
Ⅳ Krav til nukleinsyreekstraksjon og rensing blir resultatets
① For å sikre integriteten til den primære strukturen til nukleinsyre.
② Reduser interferensen av proteiner, sukkerarter, lipider og andre makromolekyler
③ Det skal ikke være noe organisk løsemiddel eller høy konsentrasjon av metallioner som kan hemme enzymet i nukleinsyreprøver.
④ RNA og annen nukleinsyrekontaminering bør elimineres ved ekstrahering av DNA, og omvendt.
Innleggstid: 24. november 2022
